产品货号:
MT0048
中文名称:
质粒小量提取试剂盒(1.8mL)
英文名称:
Plasmid Mini Extraction Kit(1.8mL)
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使质粒能在离心过柱的瞬间结合到质粒纯化柱上,在一定条件下又能将质粒充分洗脱,从而实现质粒的快速纯化。该质粒提取试剂盒采用改进的质粒抽提系统,彻底解决了RNA污染的问题。新型的离子交换柱具有高达40μg的结合能力,每个纯化柱可用于抽提1~5mL LB培养过夜的大肠杆菌菌液,抽提所得的质粒的OD值一般在1.80左右。由本试剂盒抽提所得的质粒可直接用于转化、DNA测序、PCR、基于PCR的突变、体外转录、酶切等。
产品组成:
保存条件:室温避光保存,有效期2年。(RNase A置于-20℃保存)
注意事项:
操作方法:
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产品组成:
组分 | 规格 |
Buffer A(重悬液) | 25mL |
Buffer B(裂解液) | 25mL |
Buffer C(结合液) | 30mL |
Washing Buffer(洗涤液) | 20mL |
Elution Buffer(洗脱液) | 10mL |
RNaseA(20mg/ml) | 0.5mL |
吸附柱及套管 | 100套 |
保存条件:室温避光保存,有效期2年。(RNase A置于-20℃保存)
注意事项:
- 首次使用Washing Buffer(洗涤液)时应加入80mL无水乙醇并混匀,请及时做好标记,首次使用Buffer A时应加入0.5mL的RNase A并做好标记。
- 如Buffer B出现沉淀,可50℃加热处理至沉淀溶解后仍可使用,不影响试验结果。
操作方法:
- 取过夜培养的菌液1.8mL加入到2mL EP管中,13000rpm室温离心1min后收集细菌沉淀。倒掉上清液,可再次加入菌液1.8mL,离心后去除上清液。
- 每管加入250μL Buffer A(确认已经加入RNase A),用吸头吹打沉淀菌体至无可见细菌团块,以确保沉淀完全散开。
- 每管加入250μL Buffer B,轻轻颠倒离心管4~6次,室温放置2分钟,使细菌完全裂解,溶液应变的透明。切勿剧烈振荡,否则会导致基因组DNA断裂,从而导致所得质粒被基因组DNA污染。
- 每管加入350μL Buffer C,随即颠倒离心管4~6次混匀(切勿剧烈振荡),可见白色絮状物产生,室温静置1min。
- 手腕用力上下振荡4~6次,使白色絮状物振散,然后置于离心机上13000rpm室温离心10min。
- 将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内,13000rpm离心30s,倒弃收集管内液体。(切勿吸入白色沉淀,否则会堵塞离心柱)。
- 在质粒纯化柱内加入500μL Washing Buffer(务必确认已加入无水乙醇),13000rpm室温离心30s,洗去杂质,倒弃收集管内液体。
- 重复步骤7一次。
- 将吸附柱重新放入套管中,13000rpm室温空离心2min。
- 将质粒纯化柱置于新的1.5mL离心管上,静置2min,使痕量乙醇完全挥发,加入80~120μL Elution Buffer至管内柱面上,放置1min。Elution Buffer使用前最好50℃水浴预热。
- 13000rpm室温离心2min,所得液体即为高纯度质粒。
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